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ELISA大致分为五种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法、捕获包被法。在
ELISA
试剂盒中用得比较多的是双亚盈体育app官网入口夹心法、竞争法和间接法。那么接下来酶标小编就先和你们谈谈双抗夹心法吧。
双亚盈体育app官网入口夹心法中抗原的2个不同的抗原表位被两个亚盈体育app官网入口
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捕捉亚盈体育app官网入口和检测亚盈体育app官网入口，分别结合。捕捉亚盈体育app官网入口固定于载体即酶标板上，检测亚盈体育app官网入口通过结合抗原进行显色分析。应用于双亚盈体育app官网入口夹心法检测的捕捉亚盈体育app官网入口通常是单抗，偶尔有用多抗做为捕捉亚盈体育app官网入口的情况，但很少见，因为以多抗作为捕捉亚盈体育app官网入口容易出现交叉反应而降低特异性。检测亚盈体育app官网入口通常为多抗，在科研试剂盒中经常用到生物素标记的山羊多抗，再让生物素标记的多抗与
HRP
标记的亲和素或者链霉亲和素结合，然后再加
HRP
也就是辣根过氧化物酶的底物，通常是
TMB
反应显色，这种方法是在传统的
HRP
酶标记亚盈体育app官网入口的双亚盈体育app官网入口夹心法
ELISA
中引入了生物素
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亲和素放大系统。
不过也有用单抗做检测亚盈体育app官网入口的情况，尤其是在科研中。双亚盈体育app官网入口夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原
——
例如在医学检测中测定
HBsAg
、
HBeAg
、
AFP
等疾病相关的，以及在科研中检测细胞因子等。由于双亚盈体育app官网入口夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标亚盈体育app官网入口同时加入进行反应，称为双亚盈体育app官网入口夹心一步法，因为操作时间短，在生产中有很大优势。但双亚盈体育app官网入口夹心一步法要特别注意
ELISA
中的钩状效应
(hook ffect)
，因为此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相亚盈体育app官网入口和酶标亚盈体育app官网入口均有结合而无法形成
“
夹心复合物
”
，此时测出的结果将低于实际含量甚至是阴性结果。因此，如果使用双亚盈体育app官网入口夹心一步法测定样本中抗原含量时要注意测量的线性范围，另外使用高亲和力的单抗也可削弱钩状效应。
双抗原夹心法中抗原被包被于固相，检测样本中的亚盈体育app官网入口结合于抗原后，使用酶标的抗原进行结合及后续反应，可以用来测定样本中的亚盈体育app官网入口。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构进行设计，在医学检验上测定抗HBsAg亚盈体育app官网入口采用的就是此法，检测时被测样本不需要稀释即可直接进行测定。
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